产品说明
膜再生液亦即Western一抗、二抗去除液(Stripping buffer),用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗、二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照,或检测其它蛋白进行比较。通过使用膜再生液,充分去除一抗、二抗,可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样所形成的误差,使可比性更强。
使用膜再生液多次重复使用同一张膜,会导致蛋白信号的减弱。但是,本品经过多个抗体的检测试验,通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约30-40分钟即可实现蛋白膜的重复使用,然后可以进行封闭等后续的Western操作。
本产品不含有毒的β-巯基乙醇。不同的膜再生液主要在去除结合的一抗、二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗、二抗的结合,同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。
使用说明
1. 在完成Western化学发光检测后,用PBST或TBST漂洗2次,每次10分钟。
2. 弃PBST或TBST漂洗液,加入适量的膜再生液,至少需把膜完全覆盖。在室温摇床上孵育10分钟,弃膜再生液。再加入适量的膜再生液继续孵育10分钟。
3. 弃膜再生液,加入PBST或TBST漂洗2-3次,每次5分钟。然后再重新加入封闭液。
4.进行封闭(blocking)等Western的后续操作。
注意事项
使用辣根过氧化物酶(HRP),任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶,如果使用碱性磷酸酯酶,任何一次封闭 都应当使用酪蛋白(casein)。
为取得最佳效果,推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本产品。使用ECL、BeyoECL等类似的化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测,例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。本产品有轻微腐蚀性,使用时请注意防护。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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