产品简介

Coolaber出品的系列固定浓度SDS-PAGE凝胶制备试剂盒，仅包含APS，5%浓缩胶制胶液，及单一浓度的分离胶制胶液三种试剂。APS为固体粉末形态，且为小包装多支，便于储存和配制；分离胶及浓缩胶制备仅需相应的制胶液与10% APS溶液按100:1混合，依次注入制胶模具成胶即可，无需自备试剂，尤其是无需添加TEMED，既安全环保，又便于快速制胶；浓缩胶制胶液内已加入红色染料，便于准确上样，且实验证明该染料对电泳及后续实验无不良影响。但请注意该系列制胶试剂盒只可用于单一分离胶浓度SDS-PAGE胶的制备，请根据“产品货号及品名”选择相应货号产品。如需小量制备多种浓度分离胶请选购SK6010产品。

产品组成

注意：

1.过硫酸铵（APS）为结晶性粉末，2-8 ℃储存，使用前每支加入1 mL蒸馏水即为10% APS溶液，现配现用最佳，溶液用后-20 ℃可储存2个月。APS如出现严重结块，即已变质。

2.本试剂盒制胶液无需添加TEMED。如需加快成胶，也可按1‰补加TEMED（本试剂盒不提供）。

操作步骤

（以0.75mm厚mini胶为例）

一、灌制分离胶

1. 参照制胶模具说明，装配好模具。

2. 取分离胶制胶液4 mL，按1%加入40 μL 10% APS溶液，吹打混匀，避免产生气泡。

3. 注入模具（留少许以判断凝胶状态），通过抽真空或者吸水滤纸去除气泡，凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约1.5 cm或距梳齿0.5 cm，轻轻加入1 mL水覆盖封胶，使分离胶表面保持平整。

4. 静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表明凝胶已聚合。

二、灌制浓缩胶

1. 倒掉分离胶上的水层。

2. 取浓缩胶制胶液1 mL，按1%加入10 μL 10% APS溶液，吹打混匀，避免产生气泡。

3. 注入模具的分离胶的上面（留少许以判断凝胶状态），通过抽真空或者吸水滤纸去除气泡，至前玻璃板的顶端。

4. 插入梳子，避免产生气泡。

5. 静置30-60分钟，待上层凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。

6. 进行常规电泳操作。使用Tris甘氨酸电泳液建议电泳条件：初始电压80V，约30分钟，样品进入分离胶后，电压调至120V，约1小时，样品抵达凝胶底部停止电泳。

注意事项

1.APS溶液常温不稳定，取用后立即放回-20 ℃冰箱；若发现凝胶时间延长，应更换APS溶液。

2.PAGE凝胶的凝聚速度受温度影响，室温较低时，可以增加50%-100%的APS使用量。

3.在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4.在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

5.丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围：

附表2.常见问题与解决建议: