产品简介

EasyGeno 重组试剂盒基于DNA序列同源性进行片段重组，可快速将单个或多个片段定向克隆到任意载体中。精心设计的一管式预混试剂2×EasyGeno Assembly Mix可将线性化的载体和插入DNA片段在同源区域进行重组连接，得到无缺口的闭环质粒，继而直接转化感受态细胞并筛选克隆。该方案摆脱了酶切位点的限制，仅需通过PCR在插入DNA的两端加入线性化载体15 bp的一致性序列，即可实现目的片段定向重组进入载体。重组反应可在恒温条件下快速进行 (50℃处理 15 min)，并能保证所得阳性率在 95% 以上。本试剂盒还能够实现多目的片段同时定向重组进入载体以及高通量的载体构建。

产品特点

■ 载体构建不受酶切位点限制

■ 15分钟实现片段和载体的重组

■ 效率是传统双酶切连接的 5-10 倍

■ 可实现 100 bp-15 kb片段构建进入载体

■ 可实现 1-5 个片段同时定向构建进入载体

应用方向

构建流程

实验结果

1. 使用天根EasyGeno 及A 公司同类产品分别将单个DNA 片段重组进入pUC19。所使用的片段分别为2 kb、3.5 kb 和8kb 的片段，横坐标为DNA 插入片段长度。

2. 使用天根EasyGeno 及A 公司同类产品分别将2 个和3 个DNA 片段同时重组进入pUC19。所使用的片段分别为2 个1 kb 的DNA 片段和3 个0.5 kb 的DNA 片段，横坐标为DNA 插入片段长度。

8 kb 片段定向重组进入pUC19 载体

pUC19 载体经EcoRI 和HindIII 限制性内切酶线性化，插入片段与线性化载体间带有15 bp 的重叠序列。重组后转化感受态细胞。从平板中随机挑取菌落于LB 培养基中振荡培养，阳性克隆酶切产生8 kb 的目的带。提取各个菌株的质粒，并进行EcoRI 和HindIII 双酶切鉴定。

两个1 kb 片段串联重组进入pUC19 载体

pUC19 载体经EcoRI 和HindIII 限制性内切酶线性化，片段A 和片段B 及线性化载体间均带有15 bp 的重叠序列。重组后转化感受态细胞。从平板中随机挑取菌落进行菌落PCR 鉴定，阳性克隆在PCR 扩增后会获得约2 kb 的条带。