1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液（过滤除菌）

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货号：CC203

品牌：Coolaber

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CC203-100mL	100 mL	瓶	¥118.00	请登录	请登录

产品简介

1M的山梨醇一般用于酿酒酵母或者裂殖酵母电转感受态的制备。

酵母感受态细胞的制备：

1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线，在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时，接种。

3.首先把酵母细胞接种到50 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到1.3-1.5范围内。

4.将酵母菌置于冰上放置10 min后，收集细胞。1000 g，离心5 min, 去上清。

5.沉淀用30-50 ml的预冷的无菌水悬浮。1000 g，离心5 min，去上清。重复洗涤2次。

6.沉淀用5mL 冰上预冷的1M 山梨醇溶液重悬。1000 g，离心5 min，去上清。

7.沉淀用0.4 mL 的预冷的1M 山梨醇溶液重悬，按照40 uL 分装。

酵母转化：

1.在40uL 的酵母感受态细胞中，加入5uL（100ng）的质粒，混匀。

2.转移到预冷的电转槽中，电击。

3.在电转槽中加入500uL 预冷的1M 山梨醇溶液，轻柔混匀。

4.涂布于相应的筛选培养基上，28-30℃培养3-5天。

储存条件

4℃保存，有效期 1 年。

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