特点
产品详情
QIAGEN Plasmid Kits应用重力流阴离子交换柱纯化转染级质粒DNA。该试剂盒可纯化获得至多2.5 mg的质粒DNA。离心获得澄清的裂解产物和异丙醇沉淀。
转染效率与质粒纯化方法。
采用不同方法制备pRSVcat DNA,通过脂质体介导的转染将其导入指定的细胞系内,40小时后测定CAT表达水平,确定转染效率。每个柱形代表4个独立的转录的平均值(2个质粒制备物分别转染2次)。使用QIAGEN Plasmid Kit可获得最高的转染效率。
QIAGEN Plasmid Kit实验方案。
将中性细菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge内孵育,数秒内即可过滤澄清。然后将澄清的裂解物上样至阴离子交换纯化柱,在适当的低盐和pH条件下,质粒DNA会选择性地结合上去。利用中盐浓度的洗涤液去除RNA、蛋白质、代谢物及其他低分子量杂质,使用高盐缓冲液洗脱超纯的质粒DNA。利用异丙醇沉淀对DNA进行浓缩并脱盐,并通过离心收集。
性能
QIAGEN Plasmid Mega Kits利用重力流QIAGEN-tip 2500阴离子交换柱高效纯化质粒DNA。只需500 ml–2.5 L培养基,即可纯化获得多达2.5 mg高拷贝质粒DNA。(培养容量取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌株和培养基。)QIAGEN Plasmid Kits纯化的质粒DNA适合多种应用,如:转染、克隆和体外转录。
原理
QIAGEN-tips内独特的阴离子交换树脂专为纯化核酸设计。它独特的分离特性,使纯化的DNA的纯度相当于连续2次CsCl梯度离心得到的DNA纯度。预装的QIAGEN-tips利用重力流原理工作,缩短了纯化质粒的手动操作时间。整套QIAGEN质粒纯化体系避免使用苯酚、氯仿、溴化乙锭和CsCl等有毒物质,减小对使用者和环境的危害。
操作流程
使用QIAGEN Plasmid Kits,细菌裂解物通过离心澄清。澄清后的裂解物上样到阴离子交换柱,质粒DNA在适当的低盐条件和pH条件下与树脂进行选择性结合。RNA、蛋白质、代谢产物和和其它低分子量杂质用中盐洗涤液去除,用高盐缓冲液洗脱纯质粒DNA。纯化得到的DNA用异丙醇沉淀浓缩和脱盐后,离心收集。
应用
QIAGEN Plasmid Kits纯化得到的质粒DNA适合多种应用,如:
· 转染
· 体外转录
参数
特点 | 参数 |
Applications | Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing etc. |
Culture volume/starting material | 500 ml – 2.5 liters culture volume |
Plasmid type | High-copy, low-copy, cosmid DNA |
Processing | Manual (centrifugation) |
Samples per run; throughput | 1 sample per run |
Technology | Anion-exchange technology |
Time per run or prep per run | 220 min |
Yield |
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