■ 制品内容 (50 次量) | ||||||||||||||||||
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■ 制品说明 | ||||||||||||||||||
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■ 各种引物的序列 | ||||||||||||||||||
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■ Positive Control RNA | ||||||||||||||||||
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。 | ||||||||||||||||||
图1. Positive Control RNA:使用Control Primer可以扩增462 bp的DNA片段 | ||||||||||||||||||
■ 原理 | ||||||||||||||||||
PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2(Dye Plus)可在同一反应管中连续进行由PrimeScript RTase将RNA反转录为cDNA,再由TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA的RT-PCR反应。 | ||||||||||||||||||
图2. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 原理图 | ||||||||||||||||||
■ 保存 | ||||||||||||||||||
-20℃。 | ||||||||||||||||||
■ 试剂盒特点 | ||||||||||||||||||
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■ 使用注意 | ||||||||||||||||||
1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液,然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 | ||||||||||||||||||
2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。 | ||||||||||||||||||
3. 2 X 1 Step Buffer (Dye Plus) 使用前用Vortex充分混匀,离心后使用。 | ||||||||||||||||||
4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放回-20℃中保存。 | ||||||||||||||||||
5. 为了防止Positive Control RNA分解,应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃~-80℃。 | ||||||||||||||||||
6. 分装试剂时务必使用新的枪头,以防止样品间污染。 | ||||||||||||||||||
7. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物,Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。 |
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