产品简介
本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全部试剂,只需自备蒸馏水,即可制备各种浓度的变性PAGE凝胶,方便、快捷、安全、实惠。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中均已加入SDS,使用时无需额外加入,分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置2-8 ℃可能出现絮状,为SDS析出,常温放置一会溶液恢复澄清后继续使用。因为制备凝胶浓度不同,本品只给出规格仅为大概制胶数量。如需购买固定胶浓度的试剂盒请选择SK60106/08/10/12/15等货号产品。
产品组成
注意:过硫酸铵(APS)为结晶性粉末,2-8 ℃储存,使用前每支加入1 mL蒸馏水即为10% APS溶液,现配现用最佳,溶液用后-20 ℃可储存2个月。APS如出现严重结块,即已变质。
操作步骤
(以0.75mm厚mini胶为例)
一、灌制分离胶
1. 参照制胶模具说明,装配好模具。
2. 取分离胶制胶液4 mL,按1%加入40 μL 10% APS溶液,吹打混匀,避免产生气泡。
3. 注入模具(留少许以判断凝胶状态),通过抽真空或者吸水滤纸去除气泡,凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约1.5 cm或距梳齿0.5 cm,轻轻加入1 mL水覆盖封胶,使分离胶表面保持平整。
4. 静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表明凝胶已聚合。
二、灌制浓缩胶
1. 倒掉分离胶上的水层。
2. 取浓缩胶制胶液1 mL,按1%加入10 μL 10% APS溶液,吹打混匀,避免产生气泡。
3. 注入模具的分离胶的上面(留少许以判断凝胶状态),通过抽真空或者吸水滤纸去除气泡,至前玻璃板的顶端。
4. 插入梳子,避免产生气泡。
5. 静置30-60分钟,待上层凝胶聚合后,小心地拔出梳子,避免破坏加样孔。
6. 进行常规电泳操作。使用Tris甘氨酸电泳液建议电泳条件:初始电压80V,约30分钟,样品进入分离胶后,电压调至120V,约1小时,样品抵达凝胶底部停止电泳。
注意事项
1.APS溶液常温不稳定,取用后立即放回-20 ℃冰箱;若发现凝胶时间延长,应更换APS溶液。
2.PAGE凝胶的凝聚速度受温度影响,室温较低时,可以增加50%-100%的APS使用量。
3.在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
4.在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
5.丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿戴实验服和一次性手套。
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