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Synthetic siRNA Quantitation Core Kit

货号：6142
品牌：TaKaRa
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6142 30 Rxns EA ¥5112.00 请登录 请登录
■ 制品内容 (30次量)*1
1. Terminal Transferase Buffer 390 μl
2. Terminal Transferase 30 μl
3. dATP 150 μl
4. Recombinant RNase Inhibitor 30 μl
5. Oligo dT Primer*2 150 μl
6. RT Buffer 270 μl
7. RT Enzyme Mix 30 μl
8. Universal Primer (10 μM) 120 μl
9. EASY Dilution (for Real Time PCR) 1 ml
10. Control siRNA (20 nM) 10 μl
11. Control Primer (10 μM) 20 μl
*1 含 poly dA 加尾反应及反转录反应 30 次反应量、Real Time PCR用Universal Primer 120 次反应量。
*2 本制品专用Oligo dT Primer。
 
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 制品说明
在动物或细胞中siRNA对特定基因敲除效果的验证，在医药领域被广泛应用。
本制品是对合成siRNA进行定量的试剂盒，通过Real Time PCR解析方法，对细胞、组织、血液等提取的Total RNA样品中siRNA的残余量进行测定。
siRNA化学合成时一般在3’末端带有两个脱氧胸腺嘧啶(dT)碱基。本试剂盒在3’末端(dT)加上poly(A)尾，再利用特别设计的Oligo dT Primer进行反转录反应，即使在Total RNA存在的条件下也能制备与siRNA互补的cDNA。以合成的cDNA为模板，利用TB Green® Premix Ex Taq Ⅱ (Tli RNaseH Plus)等试剂盒中的嵌合法进行Real Time PCR，对合成的siRNA进行高灵敏度的定量。
注意：1. 本试剂盒应用于3’末端带有脱氧胸腺嘧啶d(TT)的siRNA的定量。
2. 合成的siRNA 3’末端两个(dT)碱基以外带有DNA序列时，可以通过更改Oligo dT Primer序列，使用本试剂盒。
3. 合成的siRNA 3’末端没有添加(dT)碱基或者3’末端为RNA时，不能使用本试剂盒。
 
■ 实验例
小鼠血液中合成siRNA的定量模拟实验
【 方法 】
在50 μl小鼠全血(柠檬酸钠抗凝剂)中分别添加10 amol、1 fmol、100 fmol的Control siRNA后，使用RNAiso Plus(Code No.: 9108)及Dr. GenTLE Precipitation Carrier(Code No.: 9094)制备Total RNA(50 μl)。
使用本制品和TB Green Premix Ex Taq II (Perfect Real Time) 进行Real Time PCR反应，对Control siRNA进行定量检测。
【 结果 】
使用本制品，通过Real Time PCR解析方法，对于添加到小鼠血液中的siRNA进行了定量。
图. 小鼠血液样品中掺入的Control siRNA定量结果
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