RNeasy 96 QIAcube HT Kit

用于在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动纯化组织和动物细胞中分离RNA
货号:74171
品牌:QIAGEN
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特点

  • 简便、可靠的自动处理,节省时间和费用
  • 灵活的流程可以分离RNA、或包括miRNA在内的总RNA
  • 适用于多种起始材料,提供针对不同大小RNA的实验方案
  • 高品质的纯RNA可即用于多种下游应用
  • 从少量起始样本中可获得稳定产量的RNA

 

产品详情

RNeasy 96 QIAcube HT Kit能够在QIAcube HT仪器上,从动物或人类细胞和组织样本中,便利的自动纯化RNA,或包含miRNA在内的总RNA。该试剂盒采用成熟的RNeasy硅胶模技术和便利的96孔板规格,能够去除抑制剂和污染物,纯化的高品质RNA即用于下游分析。

 

性能

在QIAcube HT上使用RNeasy 96 QIAcube HT Kit纯化RNA十分便利、可靠,在96孔板上无明显的孔间差异(参见 Linear RNA recovery and Reproducible 96-well RNA purification)。

这一经济、易用的产品纯化的RNA品质与其他备受信赖的QIAGEN纯化试剂盒相同(参见 Automated purification of RNA from tissues)。使用QIAxcel Advanced对纯化产物RNA进行分析,其RIS(RNA完整度值)高,在实验中的表现与其他QIAGEN纯化方案所获得的产物相当(参见 High-quality RNA from tissues)。

 

RNeasy 96 QIAcube HT Kit从少量起始材料中纯化的RNA产量稳定(参见下表)。
细胞系 来源 RNA产量
(µg /105 个细胞)*
HeLa 人子宫颈癌细胞 1.6
LMH 鸡肝癌细胞 1.3
COS-7 猴肾,SV-40 transformed 3.1
Huh7 人肝癌细胞 2.0
Jurkat 人T细胞白血病 1.4
K-562 人慢性粒细胞白血病 1.9
RNeasy 96 QIAcube HT Kit纯化的总RNA的常规产量

* 不同物种、发展阶段和生长条件会导致不同产量。如果RNeasy实验流程富集的是 >200个核苷酸的RNA,总RNA产物中不包含5S rRNA、tRNA或其他低分子量RNA(占细胞总RNA的15–20%)。

 

原理

RNeasy 96 QIAcube HT Kit能够在QIAcube HT仪器上,从5 x 105个动物或人类细胞或40 mg以内的组织中自动纯化RNA或包含miRNA在内的总RNA。依据不同起始材料和所需产物大小,提供6种实验方案。细胞样本可以直接使用RNeasy 96 QIAcube HT Kit和专用的实验方案进行纯化。 组织样本(<40 mg)和需要纯化小RNA的样本需要先在QIAzol Lysis Reagent中裂解。纯化产物为高品质RNA,在众多下游应用中表现出色。

RNeasy 96 QIAcube HT Kit结合了硅胶模的选择性结合特性和96孔板的高通量优点,可在QIAcube HT仪器上全自动同时处理24–96个样本。 

从细胞中纯化总RNA的规格

规格 描述
样本数量 24–96个样本(每批8个)
样本起始体积 最多5 x 105个细胞,需在140 μl Buffer RLT中匀浆
洗脱体积 110 μl
时间长度 大约93或114*分钟内处理96个样本
大约54或73*分钟内处理24个样本

* 包括可选的DNase消化步骤。

从组织中纯化总RNA的规格

规格 描述
样本数量 24–96个样本(每批8个)
样本起始体积                     从40 mg冰冻的活20 mg稳定的组织(在750 μl QIAzol Lysis Reagent中匀浆)中获得的350 μl水相
洗脱体积 110 μl
时间长度 大约73或93*分钟内处理96个样本
大约34或54*分钟内处理24个样本

* 包括可选的DNase消化步骤。

 

从细胞或组织中纯化包含miRNA在内的总RNA
规格 描述
样本数量 24–96个样本(每批8个)
样本起始体积 从40 mg冰冻的活20 mg稳定的组织(在750 μl QIAzol Lysis Reagent中匀浆)中获得的350 μl水相
洗脱体积 110 μl
时间长度 大约78分钟内处理96个样本
大约38分钟内处理24个样本

 

操作流程

在高度易变性条件下,用异硫氰酸胍使RNase失活,手动裂解细胞,确保纯化得到完整的RNA。开始操作后,在裂解液中加入乙醇,达到合适的结合条件,然后将样本加入RNeasy 96孔板。总RNA和污染物被高效洗去。之后用少量的不含RNase的水洗脱获得高品质RNA,可即用于多种下游应用。

按照从动物或人类细胞中纯化总RNA的自动实验方案进行操作,可纯化获得长于200个核苷酸的RNA。此方法可富集mRNA,因为多数RNA小于200个核苷酸(例如5.8S rRNA、5S rRNA和tRNA,其总共占总RNA的15–20%)已被选择性去除。纯化的RNA的长度与CsCl离心纯化法(笑RNA不会沉淀下来)得到的RNA长度相当。

如需从组织中纯化总RNA,或从细胞和组织中纯化包含小RNA在内的总RNA,我们推荐使用QIAzol Lysis Reagent裂解。详细实验方案请参见试剂盒说明书。

 

应用

RNeasy 96 QIAcube HT Kit可高通量、高效的纯化RNA,可用于药物研究和科研等多领域。纯化的RNA即用于多种下游应用,包括:

  •     · RT-PCR和qRT-PCR
  •     · 差异显示 
  •     · cDNA合成
  •     · Northern印迹、点印迹和狭缝印迹
  •     · Pri引物延伸
  •     · Poly A+ RNA选择
  •     · RNase/S1核糖核酸酶保护

 

【温馨提示】本试剂盒需搭配950067在QIAcube HT仪器上使用。

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暂无参考文献