产品说明

Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒（SK2401）可以完成酿酒酵母感受态制备，感受态冻存，转化实验。最突出的优点可一次性制备200支感受态，-80 ℃冰箱可冻存一年，后续酵母转化实验无需重新制备感受态，操作简单快速，该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒（SK2400）基本相同。如需进一步提高酵母转化效率，可选用Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus（SK2402）或单独购买YPD Plus Liquid Medium（YT0004），转化产物用YPD Plus复苏，其转化效率可以提高50-100%。

储存条件

-20 ℃保存，未开封有效期24个月。Y3避免多次冻融；Y1、Y2溶液可2-8 ℃保存。

使用方法

感受态细胞的制备：（按小体积转化制备20支感受态计，可按比例扩大）

1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线，30 ℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线，30 ℃培养2-4天。

3.待酵母单菌落直径长至2 mm时，把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中，30 ℃过夜培养。

4.第二天转接到含有50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600达到0.4-0.5，3000 rpm离心5 min，弃上清。（4 ℃保存1周内的酵母菌液，用3 mL接种50 mL YPDA培养基过夜培养）

5.用10 mL Y1溶液重悬沉淀，3000 rpm离心5 min，弃上清。

6.加入1 mL Y2溶液重悬，按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管，转文库按600 μL分装，感受态细胞即制备完毕，可直接用于转化。

7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用

多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80 ℃冰箱过夜后，再取出感受态置于-80 ℃冰箱，可保存一年。使用前室温融化后用于转化。

转化预混液配制：

酵母质粒转化：

1.吸取360 μL预混液加入50 μL感受态细胞中，反复吹吸沉淀，使酵母细胞完全悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中热激60 min，每10 min混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。

3.12,000 rpm离心15 s，弃上清。

4.（可选步骤）用0.5 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s，弃上清。

5.加入400 μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养2-4天。

酵母文库转化：（需用15-50 mL离心管）

1.将2592 μL预混液加入到600 μL感受态细胞中，震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中热激90 min，每10 min混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。

3.3000 rpm离心5 min，弃上清。

4.（可选步骤）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养90 min，3000 rpm离心5 min，弃上清。

5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养2-4天。

注意事项

1. 转化全程要求无菌操作。

2. 为了保证转化效率，务必缓慢冻存感受态，感受态不宜直接用液氮冻存。

3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。