产品简介

Coolaber棉花基因组DNA快速提取试剂盒不含巯基乙醇等刺激性试剂，对于人体无害。提取的DNA OD260/280 一般在 1.8 以上，纯度高，不含污染和抑制剂，可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting, microsatellite analysis 等各种后续分子生物学实验。

本试剂盒可以有效去除棉花叶片中的多糖多酚，适用于其他多糖多酚含量高的植物样品，水亦适用于其他常见植物样品。

注意事项

1. 裂解液I 和纯化液II 容易产生沉淀，纯化液II 比较粘稠，用前均需要放置在 65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

2. 自备试剂：氯仿。

操作步骤

（一）样品裂解：

1. 液氮研磨

a. 称取棉花叶片 0.1-0.5 g 左右，剪成微小的碎片，于液氮研磨后将粉末转移至1.5 mL 的离心管中。

b. 在上述离心管中加入0.75 mL的经过65℃预热的裂解液I。

（二）样品纯化：

1. 在步骤（一）所得的裂解产物中加入 0.5 倍体积预热的纯化液II，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。（由于纯化液II 比较粘稠，可以将 1 mL 枪头剪去一截再吸取）。

2. 65℃水浴 3-5 分钟。如果室温放置，DNA 产量会降低 10-20%。

3. 加入 200 uL 自备氯仿，震荡混匀 10-30 秒。

4. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的 1.5 mL 塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。

（三）基因组DNA收集：

1. 在步骤（二）所得的上清中加入1.5倍体积的结合液III，颠倒数次混匀后，分多次上同一DNA吸附柱，每次上柱后均先室温放置 2 min，然后 12,000 rpm 离心 1 min，倒掉穿透液。

2. 在吸附柱中加入500 μL洗涤液，12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。

3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。

4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液（65-70℃预热），室温静置5 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。

5. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20ºC冰箱。