特点

•     · 去除基因组DNA
•     · 无需DNase消化
•     · 快速方便的样本处理
•     · 从多达2,000,000个细胞中纯化RNA，产量重复性好
•     · 高度标准化的操作过程

产品详情

应用RNeasy Plus 96 Kit可在96孔板中从培养细胞中高通量纯化总RNA。该试剂盒将新型的gDNA Eliminator 96孔板与RNeasy 96孔板相结合，确保纯化的RNA不受病毒和基因组DNA污染。这个快速的高标准化的纯化流程可获得高品质的RNA，且产量重复性好，也可保证在real-time RT-PCR、微阵列分析和其他下游应用中获得可靠的结果。

RNeasy Plus 96实验流程。

高效去除基因组DNA。

使用RNeasy Plus 96 Kit从Jurkat细胞（105、104、103和102）中纯化总RNA。采用可同时扩增并检测mRNA和基因组DNA序列的引物-探针组对β-actin转录本进行real-time RT-PCR分析。无RT对照（–RT）的平直扩增曲线说明无基因组DNA存在。

高品质RNA。

使用RNeasy Plus 96 Kit从图示细胞系中纯化总RNA，并在Agilent 2100 Bioanalyzer上进行分析。RIN值接近10，说明纯化RNA具有高完整性。

可靠的RNA纯化。

使用RNeasy Plus 96 Kit从10倍梯度稀释的Jurkat细胞（106至102个细胞）中纯化总RNA。对β-actin转录本进行real-time RT-PCR分析。CT值与细胞稀释度之间的线性图说明，在较宽的起始材料数量范围内可实现可靠的RNA纯化（R2 = 0.9985）。

性能

RNeasy Plus 96 Kit适用于多种细胞系，纯化的高品质RNA的Agilent RIN值接近10。此试剂盒可完全去除基因组DNA，在高度敏感的应用中可进行特定转录体的检测，如低丰度靶标的定量real-time RT-PCR分析。此外，从102–106个细胞中纯化的RNA可用于大范围的real-time RT-PCR定量分析。

原理

细胞首先在含异硫氰酸胍的强变性缓冲液中裂解和匀质化，RNases立即失活以保证完整RNA的分离。裂解液再通过gDNA Eliminator 96孔板。96孔板与高盐缓冲液结合，能选择性、高效地去除基因组DNA。加入乙醇为RNA的结合提供合适的条件，样本加入到RNeasy 96孔板。特制的96孔板每个孔都含有硅胶膜，可特异性地结合裂解细胞中的RNA。

操作流程

使用RNeasy 96孔板可实现高通量RNA纯化。应用RNeasy 96孔板之前，细胞裂解液首先通过gDNA Eliminator 96孔板。gDNA Eliminator 96孔板可在离心机（Centrifuge 4-16）上方便的操作。使用RNeasy 96孔板纯化RNA的过程是手动的，包含3个简单步骤：结合、洗涤和洗脱。板可在离心机（Centrifuge 4-16和Plate Rotor 2 x 96）或真空装置（QIAvac 96）和离心机上快速、方便的操作。在离心机上操作时最多可用2 x 106个细胞作为起始样本，在真空装置和离心机上最多可用1 x 106个细胞作为起始样本。操作流程可富集mRNA，不包括大部分小于200 nt的RNA（如rRNAs和tRNAs）。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化包含miRNA等小RNA的总RNA。

应用

纯化得到的总RNA代表了细胞的转录状态，非常适用于对少量DNA污染敏感的下游应用，如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA也能用于其他应用，包括RT-PCR、cDNA合成、Northern印迹、点印迹、狭缝印迹、引物延伸、poly A+ RNA筛选、RNase/S1核酸保护和微阵列。

96孔板规格纯化RNA十分方便，此试剂盒适用于高通量基因表达分析，如在以下领域： 

    · 药物研发

    · 生物医药研究

参数

RNeasy Plus Kits的比较