产品介绍

新赛美 LipoEnter 高效转染试剂是一种新型阳离子脂质体转染试剂，适合将 DNA 转染入真核细胞。本试剂具 有低细胞毒性，高转染效率，重复性好，操作简单等优点，转染时血清的存在不影响转染效率，贴壁细胞 和悬浮细胞都适用。为取得最佳转染效果，建议转染时使用不含抗生素培养液，转染 4-6 h 后可去除转染液。 

操作步骤 

对大多数细胞来说，可以先以 DNA(μg)与 LipoEnter(μl)比例 1:2~1:3 进行预实验，根据效果再进行比例优化。 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可对 DNA 和 LipoEnter 的比例以及细胞密度进行优化，建议 在 1:0.5~1:5 的范围内优化 DNA (μg)和 LipoEnter 比例。 一般而言，转染时高的细胞密度可以得到高的转染 效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1. 以 24 孔板为例

贴壁细胞：转染前一天，用 500μl 不含抗生素培养基接种 0.5 ~2×10⁵ 细胞，使之第二天能达到 80-90%融合。 悬浮细胞：在准备 DNA-LipoEnter 复合物之前，用 500 μ l 不含抗生素的培养基接种 4~8×10⁵ 细胞即可。

2. 对每个转染样品，进行以下操作 

a. 在 eppendorf 管里分别加入 50 μl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium 和 0.8 μg DNA 轻柔混匀(不能涡旋或 离心) ，制成 DNA 稀释液。 

b. 在另一个 eppendorf 管里分别加入 50μl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium 和 2.0 μl LipoEnter（注意用前 先混匀)，轻柔混匀，制成 LipoEnter 稀释液 ，室温静置 5 分钟。

c. 将 DNA 稀释液和 LipoEnter 稀释液混合，轻柔混匀，室温静置 20 分钟，形成 DNA-LipoEnter 复合物。DNA-LipoEnter 复合物在室温下可稳定存在 6 小时。 

3. 将 DNA-LipoEnter 复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。 

4. 在 37°C CO2 培养箱中培养 4-6 小时后更换培养基,继续培养 18~48 小时。 

5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染 24 小时后将细胞按照 1 :10 或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二 天加入选择性培养基进行筛选。 

保存条件 

4°C 保存，避免冷冻，有效期 18 个月。 

注意事项 

1. 使用高纯度 DNA 有助于获得较高的转染效率，转染前细胞必须处于良好的生长状态。 

2. 需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM®培养液或普通的 DMEM 培养液。 

3. LipoEnter 不能 vortex 或离心，宜缓慢晃动混匀。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。