产品简介

pLB-Simple-T Fast快速克隆试剂盒可以高效克隆各种PCR产物和任何具有粘性末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。阳性选择载体和插入片段连接仅需5 min即可获得超过95%的阳性重组克隆。试剂盒中配备了新型的RapiLigationMix（目录号：RT407）为高效的T4 DNA连接酶反应试剂，其中含有连接增强剂、酶稳定剂，可大大缩短连接时间、提高PCR产物的连接和克隆效率。按不同需要配备了DH5感受态细胞以及对照用超螺旋质粒，方便进行转化。

产品特点

   · 高效快速：5 min快速连接，阳性率近100%。

   · 灵敏广泛：适合低至0.025 pmol浓度片段和长至8 kb片段的高效连接。

   · 操作便捷： 配合使用新型RapiLigation Mix，只需加入载体和片段即可进行连接反应。

pLB-Simple-T Vector图谱

pLB-Simple-T Vector多克隆位点

储存条件

感受态细胞需要严格的在-90~-65℃冻存，可保存半年；其余的试剂于-30~-15℃保存，可保存一年。所有试剂避免反复冻融。（载体和连接试剂可以适当的分装成小份，防止反复冻融，以保证质量）。

注意事项

1. 连接使用的PCR片段3' 端应带有A末端，如果是使用pfu等高保真聚合酶扩增的不带A末端的平末端片段，可选用pLB零背景快速克隆试剂盒（VT205/206）或pGM-T平末端连接试剂盒（VT402）进行连接反应。

2. 转化过程中使用Control Insert DNA做对照是非常必要的，在实验出现问题时可以确定原因。

3. 建议留下部分连接产物，在出现问题后能迅速的补救，减少不必要的重复实验。

4. 涂布用量可根据具体实验作相应调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 µl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4000 rpm，2 min）后吸除部分培养液，留下适量的培养基悬浮菌体后将其涂布于一个平板中（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）。