产品介绍

新赛美生物生产的 Western 及 IP 细胞裂解液 (Cell Lysis Buffer for Western and IP without Inhibitors)，是一种在非变 性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液可以有效地裂解细胞蛋白，同时不会释放出基因组 DNA 等物质，亦 不会破坏蛋白的结构，处理好的样品可以用于 PAGE，Western，免疫沉淀(Immunol precipitation，IP)，免疫共沉淀 (Co-IP)，以及许多兼容 1%NP-40 的酶活性或者生物小分子的检测。本细胞裂解液的主要成分为 25mM TrisHcl(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40 和 5%的 glycerol 等，可有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

操作步骤

 对于培养细胞样品（仅供参考）

1. 取适当量的 Western 及 IP 细胞裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 注意： Western 及 IP 细胞裂解液不含蛋白酶等抑制剂，根据需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制剂。 

2.对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。 按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂 解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加 入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50- 100 万细胞/管，然后再裂解。 

对于组织样品： 

1. 把组织剪切成细小的碎片。 

2. 取适当量的 Western 及 IP 细胞裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 

3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解 液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 

5. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。 

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样 离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得 比较充分。 

注意事项

1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融, 可以适当分装后使用。 

2. 本裂解液不含有抑制剂，根据实验的需要，加入相应的蛋白酶或磷酸酶抑制剂。 

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。