产品简介

本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全部试剂，只需自备蒸馏水，即可制备各种浓度的变性PAGE凝胶，方便、快捷、安全、实惠。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中均已加入SDS，使用时无需额外加入，分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置2-8 ℃可能出现絮状，为SDS析出，常温放置一会溶液恢复澄清后继续使用。因为制备凝胶浓度不同，本品只给出规格仅为大概制胶数量。如需购买固定胶浓度的试剂盒请选择SK60106/08/10/12/15等货号产品。

产品组成

注意：过硫酸铵（APS）为结晶性粉末，2-8 ℃储存，使用前每支加入1 mL蒸馏水即为10% APS溶液，现配现用最佳，溶液用后-20 ℃可储存2个月。APS如出现严重结块，即已变质。

操作步骤

（以0.75mm厚mini胶为例）

一、灌制分离胶

1. 参照制胶模具说明，装配好模具。

2. 取分离胶制胶液4 mL，按1%加入40 μL 10% APS溶液，吹打混匀，避免产生气泡。

3. 注入模具（留少许以判断凝胶状态），通过抽真空或者吸水滤纸去除气泡，凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约1.5 cm或距梳齿0.5 cm，轻轻加入1 mL水覆盖封胶，使分离胶表面保持平整。

4. 静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表明凝胶已聚合。

二、灌制浓缩胶

1. 倒掉分离胶上的水层。

2. 取浓缩胶制胶液1 mL，按1%加入10 μL 10% APS溶液，吹打混匀，避免产生气泡。

3. 注入模具的分离胶的上面（留少许以判断凝胶状态），通过抽真空或者吸水滤纸去除气泡，至前玻璃板的顶端。

4. 插入梳子，避免产生气泡。

5. 静置30-60分钟，待上层凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。

6. 进行常规电泳操作。使用Tris甘氨酸电泳液建议电泳条件：初始电压80V，约30分钟，样品进入分离胶后，电压调至120V，约1小时，样品抵达凝胶底部停止电泳。

注意事项

1.APS溶液常温不稳定，取用后立即放回-20 ℃冰箱；若发现凝胶时间延长，应更换APS溶液。

2.PAGE凝胶的凝聚速度受温度影响，室温较低时，可以增加50%-100%的APS使用量。

3.在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4.在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

5.丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。