产品说明

Folin酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步用此络合物还原Folin试剂，样品溶液变为深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。蛋白质定量范围为5-100 μg/mL。Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。

储存条件

BSA蛋白标准液-20 ℃保存，其它室温保存，保质期12个月。

使用说明

制备工作液

1.根据用量，取适量Folin酚甲试剂A和Folin酚甲试剂B按50:1混合，即为Folin酚甲试剂，有效期24小时。

2.根据用量，取适量BSA标准液，用PBS稀释液稀释10倍至浓度0.5 mg/mL，即为BSA蛋白标样。

试管法（分光光度计法）

1.BSA蛋白标样及蛋白样品按下表顺序加入反应试剂，蛋白样品需适当稀释。最终所有样品量均为200 μL，每个样品加入Folin酚甲试剂2 mL混匀，室温静置10 min，再加入Folin酚乙试剂200 μL混匀。

2.室温放置30 min。A650分光光度计分别测定光度值，绘制标准曲线并计算样品蛋白浓度。

96 孔板法（酶标仪法）

1.将BSA蛋白标准样按0、2、4、6、8、12、16、20 μL加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20 μL。

2.将蛋白样品作适当稀释（建议多做几个梯度），加20 μL到96孔板中。

3.将配好的Folin酚甲试剂每孔加入200 μL，轻轻震动混匀，室温放置10 min。

4.每孔加入Folin酚乙试剂20 μL，迅速混匀，室温放置30 min。用酶标仪测定A650光度值，绘制标准曲线并计算蛋白浓度。

注意事项

1.Folin酚乙试剂只在酸性条件稳定，故当其加到碱性的铜-蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏前，还原反应即能发生。

2.为了保证反应进行完全，反应可在25-30 ℃水浴中进行，反应30 min后准时比色。 

3.还原物质会干扰本实验。

4. Lowry法的呈色物质组成尚未确定，它在红外区呈现较宽吸收峰。在550-750 nm间吸光度均与蛋白质浓度成正比。