产品说明

X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-吡喃半乳糖苷）是α-半乳糖苷酶（MEL1）的显色反应底物，更为常见的X-Gal是β-半乳糖苷酶（LacZ）的显色反应底物。α-半乳糖苷酶可水解无色的X-α-Gal底物，并生成蓝色的产物。通过肉眼可见的蓝白斑筛选，可快速而简便的识别阳性克隆。

MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因，编码外泌型的α-半乳糖苷酶。如果蛋白无互作，报告基因MEL1不表达，菌落呈乳白色；如果蛋白发生互作，报告基因MEL1表达，菌落呈蓝色，亦可根据菌落蓝色深浅，初步判断蛋白互作强度。

X-α-Gal与缺陷型筛选平板同时使用，可有效提高筛选效率，排除假阳性克隆，主要应用于酵母双杂交实验GAL4酵母表达系统中蛋白互做的阳性克隆的检测。也可用于筛选含α-半乳糖苷酶基因细菌菌株；区分肠杆菌科内的不同菌种，以及区分双歧杆菌和乳酸菌；组织化学中用于酶活性的检测等。

母液配制

X-α-Gal母液（20 mg/mL）：取20 mg X-α-Gal溶于1 mL DMF，或等比例放大，过滤除菌。

保存条件

-20 ℃避光储存，未开封有效期12个月。

使用方法

涂布于预制平板：

1.临用前用X-α-Gal稀释液（也可以用DMF）稀释X-α-Gal母液至4 mg/mL。（请于超净台无菌操作，按需稀释，稀释后的X-α-Gal勿久存）

2. 涂布200 μL（φ15 cm） 或者100 μL（φ10 cm）X-α-Gal储存液于预制平板上；

3. 置于超净台或者37 ℃培养箱至液体被吸收（可以置于超净台避光过夜晾干）；

4. 将转化细菌或酵母涂于平板上，于37 ℃或30 ℃培养直至蓝色菌斑出现。

直接加入培养基：

1.将已灭菌固体培养基冷却至50-55 ℃；

2. 100 mL固体培养基加入100-200 μL X-α-Gal母液混匀，快速倒平板。

携带MEL1基因的酵母菌株：

Y2HGold、Y190、AH109、Y187、PG69-2A。