产品简介

HIS2作为报告基因时，会有一定程度的泄漏性表达，出现背景过高的现象，一般称作自激活。这时可以在筛选培养基中加入适量的HIS2竞争性抑制剂3-AT（3-amino-1,2,4-triazole），以降低背景；或者增加一个筛选标记Ade来进行更加严格的筛选。加入的3-AT浓度过高，蛋白间比较弱的相互作用也可能被抑制，因此需要筛选确定3-AT的最适浓度。

Coolaber的3-AT溶液为经过过滤除菌的即用型母液，用于酵母杂交实验抑制本底表达，用以准确筛选出蛋白互作引发的His的报告基因的表达。

保存条件

-20 ℃储存，有效期24个月。

使用方法

1.计算所需平板的数量，计算配置培养基体积；

2.设置3-AT的浓度梯度（建议10-50 mM 的浓度范围设3-5个梯度，常用浓度约30 mM）；

3.灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55 ℃左右，加入3-AT母液，摇匀后倒板；

4.标记每个平板的3-AT浓度，超净台冷却凝胶后，按单位面积单个克隆计算培养物浓度，涂板；

5.28-30 ℃培养3-5天，筛选出最佳3-AT浓度，用于后期互做筛选。

注意

1.理想情况10 mM浓度的3-AT平板会有少量生长，20 mM浓度的3-AT不能或极少生长。如果在80 mM浓度的3-AT平板上生长酵母，说明自激活活性太高，不能用于双杂交筛选。

2.诱饵蛋白能够单独激活报告基因的表达，该蛋白如果是具有转录激活域一个转录因子，需要去掉转录激活结构域。如果不是转录因子但仍具有较强的转录激活活性，需要将诱饵蛋白具有激活活性的区域去除，但这样操作有可能影响蛋白间的互作。