产品介绍

本试剂盒用于EGY48酵母杂交系统中，LacZ报告基因的检测；当有互作发生，LacZ报告基因表达，生成β-半乳糖苷酶，将X-Gal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4氯靛蓝。

储存条件

常温保存，X-Gal储存液-20℃保存，有效期一年。

筛选培养基配制

（SD/-Trp/-Ura平板）

1.请将0.5 L的SD/-Trp/-Ura with Agar干粉，加入500mL的蒸馏水中，搅拌溶解；

2.115 ℃灭菌20 min，冷却后倒板；

注意：灭菌的培养基如有剩余，可置于超净台密封保存，再次使用时微波加热溶解后倒板即可。

显色培养基配制

（SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X-Gal平板）

1.组分配比，见下表

2.根据需要按照上表称取适量SC/-Trp/-Ura Broth和Agar，加水至75ml搅拌溶解；

3.115 ℃灭菌20 min；同时预热20%半乳糖溶液、20%棉子糖溶液、10×BU buffer至55 ℃左右；

4.培养基冷却到55 ℃左右后加入预热的上述成分以及X-gal储存液，混匀倒板。

注意： 显色平板请尽快使用。3天内避光4 ℃保存的板子亦可以使用。

实验方法

（以EGY48-pLacZi酵母单杂交体系为例） 

1.载体构建pLacZi-X & pB42AD-Y；

2.载体共转化EGY48酵母感受态细胞（参照SK2400使用说明）；

3.转化产物涂布SD/-Trp/-Ura with Agar 平板，28-30 ℃培养3-5天；

4.随机选择5个单菌落，Marker笔做好标记，挑取少量菌落做阳性克隆检测（参照SK2420使用说明）； 

5.挑取鉴定为阳性克隆的菌落涂布SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X-Gal with Agar显色平板，28-30 ℃培养3-5天后观察显色反应。