产品说明

1.感受态细胞和氨苄青霉素请-80℃储存，干冰运输。其余产品可常温或蓝冰运输。

2.SD和SG系列的产品，请在500mL的蒸馏水中，加入一包干粉，搅拌混匀后，于115℃灭菌20min后使用。

3.LB肉汤，请在500mL的蒸馏水中，加入一包干粉，搅拌混匀后，于115℃灭菌20min后使用。

4.LB琼脂，请在250mL的蒸馏水中，加入一包干粉，搅拌混匀后，于115℃灭菌20min后使用。

产品简介

本产品用于酿酒酵母蛋白表达实验，可制备诱导培养基平板25块，诱导液体培养基500mL。如需获得大量诱导表达产物，诱导培养基可以单独订购。

套装YM4000包含酵母转化、筛选、诱导所选的全部试剂，均为即用型或者预混型，使用方便，不会造成资源浪费。

套装YM4001在YM4000基础上，增加了克隆感受态细胞以及大肠杆菌培养，筛选试剂，使用方便，省去多次感受态购买运输的费用。

使用说明

一、蛋白表达载体构建

1.将目的蛋白克隆到pYES2载体（多克隆位点请参照图谱序列）。

2.将重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞中（参照TOP10F’ 感受态细胞使用说明书）。

3.用含氨苄（50-100ug/mL）的LB平板筛选转化产物。

4.挑选10-20个克隆，PCR并测序验证，筛选阳性克隆。

5.用含氨苄（50-100ug/mL）的LB培养基摇菌，用15%-25%甘油保存阳性菌。

6.利用碱裂解法提取质粒，备用。

二、重组载体酵母菌转化

1.将重组载体转入INVSc1感受态细胞（参照INVSc1感受态细胞使用说明书）。

2.转化产物涂布SD/-Ura 平板，30℃培养3-5天，筛选阳性克隆。

3.将阳性克隆，用无菌生理盐水重悬后，划线或者涂布于SG/-Ura平板，30℃培养3-5天。

4.如SG/-Ura平板生长过慢，可加入1%的棉子糖，葡萄糖会抑制GAL1启动子的转录，抑制半乳糖的利用率，棉子糖不会。棉子糖可以提高酵母在诱导培养基中的生长速度。

三、蛋白诱导表达

1.SD或SG培养筛选出来的阳性克隆，接种到15mL的SD/-Ura液体培养基中，30℃摇床过夜培养。

2.于4℃ 1,500 g 离心5min，去除上清。

3.用50mL的SG/-Ura 液体培养基重悬细胞沉淀，于30℃摇床培养。

4.离心去上清，冷冻保存或直接用于蛋白提取。