产品组分说明

1、产品组分设计针对于已知蛋白验证性实验，如需要筛库，部分筛选培养基需求量大，可单独购买。

2、产品组分设计转化方案是共转，简化培养基使用种类和操作流程。

3、如需要分步转化，单独检测自激活，培养基略有不同，可在购买前跟本公司协商调换试剂盒培养基成分。

4、酵母三杂针对于Bridge蛋白互作，实验一般很顺畅，对于Inhititorocker 蛋白互作，实验常常会遇到问题。

产品组成：（0.5 L/pouch）

储存温度

序号1-6 常温保存，序号7-8需-20℃储存，蓝冰运输。

使用说明

Yeast Three-Hybrid Media Kit（YM3000酵母三杂培养基套装）包含酵母三杂验证性实验所需要的全部培养基。整套销售，性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装，每个独立包装可以配制0.5 L的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加入0.5 L的ddH2O，然后121℃灭菌15分钟即可。无需称量和调整pH值。

Yeast Three-Hybrid Media Kit Plus （YM3001）在Yeast Three-Hybrid Media Kit（YM3000）基础上增加了3-AT（用于自激活抑制）和X-α-gal（互作蓝白斑显色验证）。

使用方法

Rich Liquid Media (Broth)

1. 序号1产品YPDA每袋干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5 L的去离子水中溶解。

2. 如有必要，调pH至6.5。121℃高压灭菌十五分钟。

3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基备用。

Minimal Plating Media with Agar

1. 序号2-6产品，每袋干粉倒入三角瓶中，加0.5 L的去离子水，搅拌溶解（琼脂高温灭菌后溶解）。

2. 如有必要，调节pH 至5.8。121℃高压灭菌15分钟。

3. 冷却到50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。

3-AT的使用方法：

1.计算所需平板的数量，计算配置培养基体积；

2.设置3-AT的浓度梯度(建议设置10-50mM 的浓度梯度，常见浓度约30mM )；

3.灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55℃左右，加入3-AT 母液，摇匀后倒板；

4.标记每个平板的3-AT浓度，超净台冷却凝固后，将转化或培养物涂板；

5.28-30℃培养 3-5天。

X-a-gal的使用方法：

（一）涂布于预制平板：

1. 储存液配制：溶解24 mg X-α-gal于6 mL DMF，终浓度为4 mg/mL。

2. 涂布200 μl（15 cm） 或者100 μl（10 cm）X-α-gal储存液于预制平板上。

3. 置于37 ℃培养箱至液体被吸收（DMF挥发性低，最长可放4小时）。

4. 将转化细菌或酵母涂于平板上，于37 ℃或30 ℃培养直至蓝色菌斑出现。

（二）直接加入培养基中：

1. 储存液配制：溶解60 mg X-α-gal于3 mL DMF，终浓度为20 mg/mL。

2. 将已灭菌固体培养基冷却至50-55 ℃。

3. 加入2-10 ml X-α-Gal储存液，混匀，快速倒平板。

酵母三杂筛库流程参考：