储存条件

-20℃保存，有效期一年，其中 Z buffer 和β-ME常温保存。

试剂和材料的准备

Whatman 5# 滤纸或Grade 410滤纸，灭菌处理; 镊子，用来夹取滤纸 ;

液氮 。

Z buffer/X-gal 溶液 ：100 ml Z buffer 

0.27 ml  β-mercaptoethanol (β-ME) 

1.67 ml X-gal 储存液（-20℃保存）

操作方法

1．为了得到最好的结果，用新鲜的克隆（一般30℃培养2-4天），菌落直径1-3mm。

2．配制Z buffer/X-gal 溶液 。

3．预先将滤纸放在盛有2.5-5.0ml的Z buffer/X-gal 溶液的培养皿中。 

4．用镊子夹取一张干净、干燥的滤纸放在长有菌落的平板上，轻轻用镊子摩擦，帮助菌落附着在滤纸上。 

5．透过滤纸，在三个不同的方位上穿孔（不对称的方位），此方法用于在培养基上确定 滤纸的方向。 

6．当滤纸均匀湿润后，用镊子小心将滤纸从培养基上取下，转移到液氮中，浸没在液氮 中10秒。 

7．取出液氮中冷冻过的滤纸，室温下融化。 

8．小心将滤纸正面朝上，放在第三步预处理的滤纸上，避免在两层滤纸中间产生气泡。 

9．将带有两层滤纸的培养皿放于30℃或室温下，定期检查蓝色菌落的出现情况。一般8小时之内变兰的可初步定位阳性克隆。 

10． 在平板上找到与蓝色菌落相对应的菌落，挑相应的蓝色菌落到新的培养基平板上。 

方法改进：

先在一个培养皿中铺一张普通灭菌滤纸，再加2.5-5.0ml Z buffer/X-gal溶液将滤纸润湿；然后将显色滤纸（Whatman 5# 滤纸或Grade 410滤纸）剪成长方形，放在培养皿中，加少量灭菌水润湿，用牙签挑取菌落轻轻在滤纸上划线，直接液氮冷冻10秒，取出室温融化，放在预先准备好的滤纸上，避免在两层滤纸间产生气泡。做好标记后， 放在30℃或室温下，定期检查蓝色菌落的出现情况。一般8小时之内变蓝的可初步定位阳性克隆。