产品参数

基质：4%琼脂糖凝胶

配基：谷胱甘肽

颗粒大小：45-165 μm

最大流速：75 cm/h

工作 pH：3-12

蛋白结合量：8 mg/ml

产品说明

Pgex载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。Pgex是一类以谷胱甘肽（γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚豪摩尔级的，谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强，因此谷胱甘肽固化琼脂糖形成的亲和层析凝胶GST及其融合蛋白的纯化效率很高，每毫升柱床体积的凝胶能结合8 mg融合蛋白。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白，凝胶用3 mol/L NaCl的缓冲液再生。

谷胱甘肽洗脱

1. 配制谷胱甘肽洗脱缓冲液，10 mmol/L还原型谷胱甘肽，50 mmol/L Tris-Cl，pH8.0。

2. 沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10 min，洗脱凝胶上结合的蛋白。

3. 4℃以500 g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至管中。

4. 重复步骤2和3二次，合并三次上清。

蛋白酶解

1. 在结合了融合蛋白的凝胶中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每毫升凝胶加入50单位蛋白酶（溶于1 mL PBS）。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时，用小规模预试验确定精确时间。

2. 4℃以500 g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在凝胶上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）。

3. 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。