特点
· 所有组织总RNA的高产率
· 快速非酶法去除基因组DNA
· 简化的QIAzol裂解和RNeasy 96纯化
· 纯净、高质量的RNA,无苯酚污染
· 适用于所有下游应用的高性能RNA
产品详情
RNeasy 96 Universal Tissue Kit集成了快速、方便的RNA纯化和有效消除基因组DNA。优化的方案能够从任何类型的组织中纯化高质量的RNA,甚至是难以溶解的组织。该试剂盒包括用于溶解脂肪组织和其他类型组织的 QIAzol Lysis Reagent ,以及用于纯化高质量RNA的RNeasy旋转柱。RNeasy Plus Universal Mini Kit 可在QIAcube Connect上实现自动化。
RNeasy 96 Universal Tissue Kit能够从任何组织中以96孔格式纯化总RNA。组织在 QIAzol Lysis Reagent 中高效裂解和均质化,并使用硅胶膜RNeasy 96板纯化高质量RNA。使用QIAGEN离心机4-16KS和QIAvac 96真空歧管(可选)进行手动净化。在BioRobot通用系统上使用相关的RNeasy 96 Universal Tissue 8000试剂盒进行自动纯化。使用Allprotect Tissue Reagent 可以方便地稳定组织样本,并使用TissueLyser II有效破坏组织样本。使用RNAprotect Tissue Reagent 可以稳定非脂肪组织。
性能
RNeasy Plus通用程序允许从任何类型的组织中获得高、可重复的RNA产量,包括脂肪组织和难以溶解的组织(见表“使用RNeasy Plus通用微型试剂盒的总RNA典型产量”)。产量可能因物种和发育阶段等因素而有所不同,尤其是脂肪组织。
RNeasy Plus Universal Kits总RNA的典型产量
Mouse/rat tissue (10 mg) | Yield of total RNA ((µg) |
---|---|
Adipose tissue | 0.5–2.5 |
Brain | 5–20 |
Heart | 5–25 |
Intestine | 10–60 |
Kidney | 5–40 |
Liver | 15–80 |
Lung | 5–15 |
Muscle | 5–35 |
Skin | 2–5 |
Spleen | 15–100 |
通过实时RT-PCR和QIAxcel系统对纯化的RNA进行分析,证明了高质量的RNA具有良好的完整性(见图“高质量RNA”)。gDNA去除剂溶液和RNeasy技术可有效去除大部分基因组DNA污染,无需DNA酶处理(见图“有效去除基因组DNA”)。
与标准硅胶膜程序相比,RNeasy 96系统为所有组织类型提供了更高的总RNA产量(见表“使用RNeasy 96Universal tissue Kit的典型总RNA产量”)。
使用RNeasy 96Universal tissue Kit的典型总RNA产量
Tissue | RNA yield* (µg per 10 mg of tissue) |
---|---|
Kidney | 5–40 |
Liver | 15–80 |
Lung | 5–15 |
Heart | 5–25 |
Muscle | 5–35 |
Brain | 5–20 |
Adipose tissue | 0.5–2.5 |
Spleen | 15–100 |
Intestine | 10–60 |
Skin | 2–5 |
通过冷冻或室温下用RNAprotect稳定,可以从保存的组织中分离出高质量的RNA(见图“大鼠肝脏和肌肉组织的高质量总RNA”)。从难以溶解的纤维和脂肪组织中纯化的完整RNA适用于下游应用(见图“来自皮肤/脂肪/肝脏/肠组织的高质量RNA”和“来自大鼠大脑的高质量RNA的实时分析”)。
原理
RNeasy Plus通用微型程序可从任何类型的组织中纯化RNA,包括脂肪组织或难裂解组织。RNeasy Plus Universal Mini Kit 集成了基于苯酚/胍的样品裂解和总RNA的硅胶膜纯化。试剂盒中包含的QIAzol裂解试剂是苯酚和硫氰酸胍的单相溶液,旨在促进各种组织的裂解并抑制RNA酶。通过有机相萃取的高效裂解和随后的污染物去除使得能够使用具有RNeasy旋转柱的大量组织。gDNA去除剂溶液有效去除基因组DNA污染,并显著改善DNA进入间期的分离。
RNeasy 96通用组织程序能够从任何动物或人类组织样品中高通量纯化RNA。与标准硅胶膜程序相比,RNeasy Plus Universal Mini Kit 为所有组织类型提供了更高的总RNA产量。RNeasy程序丰富了长度大于200个碱基的RNA,提供的总RNA产量不包括5.8S rRNA、tRNA和其他低分子量RNA,这些RNA占细胞总RNA的15–20%。
步骤
RNeasy Plus通用程序易于遵循,与使用苯酚/氯仿提取总RNA的后续清理程序相比,RNeasy Plus通用程序速度更快、效率更高,RNA纯度和产量更好(见流程图“RNeasy Plus Universal Mini程序”)。使用RNeasy Plus Universal Mini Kit 从高达50 mg的组织中纯化总RNA。
使用TissueRuptor II、TissueLyser LT或TissueLyser II在QIAzol裂解试剂中均化组织样品。加入gDNA去除剂溶液和氯仿后,通过离心将匀浆分离为水相和有机相。收集含有RNA的上层水相,与乙醇混合,并使用RNeasy旋转柱纯化RNA。总RNA结合到旋转柱膜上,苯酚和其他污染物被有效地洗掉。高质量RNA在不含RNA酶的水中洗脱。
由于大多数小于200个核苷酸的RNA(如rRNA和tRNA)被排除,该程序提供了mRNA的富集。RNeasy Plus通用程序可以修改,以允许从培养细胞中纯化含有小RNA(如miRNA)的总RNA。
优化的RNeasy 96通用组织程序将TissueLyser/QIAzol处理与RNeasy 1996纯化结合在一个易于遵循的方案中(见流程图“RNeasy 96Universal Tissue程序”)。使用TissueLyser II的高效高通量破坏提供了平行破坏和均匀化,在QIAzol裂解试剂中裂解多达192个样品。协议步骤使用QIAGEN 96孔板离心系统手动执行,可选使用QIAvac 96 vacuum manifold。
应用
使用RNeasy Plus Universal Kits 纯化的RNA非常适合于对少量DNA污染敏感的下游应用,如RNA-seq、定量实时RT-PCR。纯化的RNA也可用于其他应用。
QIAzol和RNeasy技术的结合产生了无酚携带的高纯度RNA。使用RNeasy 96 Universal Tissue Kit纯化的RNA适用于所有下游应用,包括RNA序列、实时RT-PCR和阵列分析。
RNeasy Universal Kits的比较
Features | RNeasy Plus Universal Mini Kit | RNeasy 96 Universal Tissue Kit |
---|---|---|
Applications | Northern, dot, and slot blotting, end-point RT-PCR, quantitative, real-time RT-PCR, array analysis, next-generation sequencing | PCR, qPCR, real-time PCR |
Elution volume | 30 µl; | 45–70 µl |
Format | Mini | 96-well plate |
Integrated removal of genomic DNA | Yes | No |
Main sample type | Tissue samples including difficult-to-lyse and demanding tissues | Tissue samples |
Processing | Manual (centrifugation), automated (QIAcube Connect) | Manual (centrifugation or vacuum) |
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | RNA | RNA |
Sample amount | 5–50 mg | 25–100 mg |
Technology | QIAzol/spin column technology | Silica technology |
Yield | Varies | Varies |
产品介绍与指南 (3)
1、All insights start with the sample: Your comprehensive guide for isolating top-quality RNA
2、RNA Functional Analysis – enhanced by LNA
3、(EN) - Analyzing Gene Expression and Regulation
快速启动实验方案 (3)
1、RNeasy 96 Universal Tissue 8000 Kit Quick-Start Protocol (EN)
2、RNeasy 96 Universal Tissue Kit Quick-Start Protocol
3、RNeasy Plus Universal Quick-Start Protocol
试剂盒操作手册 (2)
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