产品简介
蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase, SP)(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,属于糖基水解酶 13 家族,是一种催化转移葡萄糖苷键的酶,能够催化蔗糖和无机磷酸盐合成 1-磷酸-葡萄糖。该酶主要以蔗糖、1-磷酸葡萄糖为供体,多类物质如多羟基的糖和糖醇、酚羟基、羧基等为受体,催化合成各种糖苷。
SP 能够催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6-磷酸葡萄糖,在 6-磷酸葡萄糖脱 氢酶作用下还原NADP+生成 NADPH,导致 340nm 光吸收值增加。通过 340nm 吸光度的增加速率来反映 SP 活性。
溶液的配制
1、 试剂二:临用前加入 15 mL 蒸馏水,充分混匀。4℃可以保存 4 周;
2、 试剂四:临用前取 1 瓶加入 1.5 mL 蒸馏水,充分混匀。分装后-20℃保存,避免反复冻融,可以保存2 周;
3、 试剂五:粉剂置于瓶内玻璃管中。临用前加入 10 mL 蒸馏水,充分混匀。-20℃分装保存,避免反复冻融,可以保存 4 周;
4、 试剂六:临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存,避免反复冻融,-20℃可以保存 2 周;临用前按试剂六:蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂六,现用现配;
5、 试剂七:临用前取 1 支加入 0.7 mL 蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存,避免反复冻融,-20℃可以保存 2 周;临用前按试剂七:蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂七,现用现配。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器、1mL 石英比色皿、冰和蒸馏水。
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