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特点
- · 独特的gDNA Eliminator柱，无需DNase处理
- · 有效去除基因组DNA
- · 数分钟内得到RNA，产量重复性好
- · RNA在敏感的下游应用中表现出色
产品详情
RNeasy Plus Mini Kit将快速方便的RNA纯化与高效去除基因组DNA整合在一起，可纯化至多100 µg RNA。细胞或组织裂解液流过gDNA去除柱，去除基因组DNA。然后使用RNeasy Mini离心柱纯化总RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行。可使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定组织样本，并使用TissueRuptor或TissueLyser体系高效破碎样本。处理较小样本，可使用RNeasy Plus Micro Kit（离心柱的结合能力为45 µg RNA）。
RNA产量具有高度可重复性。
使用RNeasy Plus Mini Kit或Supplier AV的类似试剂盒，从不同量的Jurkat细胞中纯化总RNA，重复两次。对β-actin进行real-time RT-PCR分析（40个循环）。使用RNeasy Kit可获得较低的CT值，说明其具有较高的RNA产量。使用Supplier AV的试剂盒，则未从102个细胞纯化的RNA中检测到转录本。
高效去除组织的基因组DNA。
使用RNeasy Plus Mini Kit或其他供应商的试剂盒，从各种小鼠组织（每个样本10 mg）中纯化总RNA，重复两次。对c-jun进行real-time PCR分析，测定纯化RNA中DNA污染物的量。
RNeasy Plus实验流程。
利用较短的工作流程，只需不到30分钟即可完成RNA纯化并去除基因组DNA。
高效去除细胞的基因组DNA。
使用 [A] RNeasy Plus Mini Kit或者 [B] Supplier AV的整合基因组DNA去除步骤的RNA纯化试剂盒，从Jurkat细胞样本（每个样本1 x 106个细胞）中纯化总RNA。使用（+RT）或不使用（-RT）逆转录酶对β-actin进行两次重复的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明，使用RNeasy Plus Mini Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。
可直接用于芯片分析的RNA。
使用RNeasy Plus Mini Kit从1 x 106个HeLa细胞中纯化总RNA，重复两次。使用GeneChip IVT Labeling Kit从两个重复的RNA样本（各3.5 μg）中制备cRNA。在GeneChip Human Genome U133A probe芯片上分析cRNA样本（各15 μg）。散点图显示了两个样本间的相关性（Pearson相关系数 [r] 为0.996）。红色：两个样本中均存在的基因；蓝色：在一个样本中不存在或者处于临界状态的基因；黄色：在两个样本中均不存在或者处于临界状态的基因。
性能
RNeasy Plus Mini操作流程可从细胞和组织中纯化得到重复高产的RNA，并高效去除基因组DNA污染，用于敏感的下游应用。通常从培养细胞中可获得Agilent RIN值接近10的总RNA。
原理
细胞和易裂解组织首先在含有异硫氰酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化，该缓冲液能使RNases立即失活，以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用，可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件，样本再加入到RNeasy Mini离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。
操作流程
可从多达107个细胞或30 mg组织中纯化总RNA。简洁的工作流程可在25分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱，在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇，样本再加上样到RNeasy Mini离心柱。RNA结合到膜上，污染物被洗去。获得高品质RNA，洗脱体积30 µl或更大。
处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。此操作流程适合富集mRNA，不包括大部分小于200 nt的RNAs（如rRNAs和tRNAs）。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化含miRNA等小RNAs的总RNA。
使用Buffer RLT Plus（RNeasy Plus Mini Kit提供）进行组织破碎和匀质化时，可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX（单独提供）可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测，表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。
应用
RNeasy Plus Mini Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA敏感的下游应用，如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可以用于其他应用。
参数
| 特点 | 参数 |
| Applications | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
| Elution volume | 30-50 µl |
| Format | Spin column |
| Integrated removal of genomic DNA | Yes |
| Main sample type | Tissue, cells |
| Processing | Manual (centrifugation) |
| Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | Total RNA |
| Sample amount | 30 mg ( |
| Technology | Silica technology |
| Time per run or per prep | 25 minutes |
| Yield | Varies |
RNeasy Plus Kits的比较
| Features | RNeasy Plus Micro Kit | RNeasy Plus Mini Kit | RNeasy Plus 96 Kit |
|---|---|---|---|
| Applications | RNA-seq, quantitative real-time RT-PCR, end-point RT-PCR, Northern dot and slot blotting, microarray analysis | RNA-seq, quantitative real-time RT-PCR, end-point RT-PCR, Northern dot and slot blotting, microarray analysis | RNA-seq, quantitative real-time RT-PCR, end-point RT-PCR, Northern dot and slot blotting, microarray analysis |
| Elution volume | 14 µl | 30–50 µl | 45–140 µl |
| Format | Spin column | Spin column | 96-well plate |
| Integrated removal of genomic DNA | Yes | Yes | Yes |
| Main sample type | Tissue, cells | Tissue, cells | Cultured cells |
| Processing | Manual (centrifugation) | Manual (centrifugation) | Manual (centrifugation, vacuum) |
| Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | Total RNA | Total RNA | Total RNA |
| Sample amount | 5 x 105 cells or 5 mg tissue | 107 cells or 30 mg tissue | 10 to 5 x 105 cells |
| Technology | Silica technology | Silica technology | Silica technology |
| Time per run or per prep | 25 minutes | 25 minutes | – |
| Yield | Varies | Varies | 1.3–3.1 µg (from 1 x 105 cells) |
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