特点

•     · 立即稳定唾液样本中的RNA
•     · 在室温下进行方便的稳定
•     · 无需冰或干冰储存和运输唾液样本
•     · 可在–20ºC或–80ºC下存档唾液样本
•     · 数分钟内即可纯化高品质RNA

产品详情

RNeasy Protect Saliva Mini Kit包含RNAprotect Saliva Reagent和RNeasy Micro Kit，前者用于稳定唾液样本中的RNA以保存基因表达谱，后者使用独特的RNeasy MinElute离心柱纯化和浓缩总RNA。稳定后的唾液样本在RNA纯化之前可以方便地保存或运输，37°C（1天）、15–25°C（14天）或2–8°C（4周）。200 μl唾液样本经RNA纯化之后浓缩在14 μl的体积中。

RNeasy Protect Saliva实验流程。

将唾液中转录本降解水平最低化。

在唾液样本中加入或不加入RNAprotect Saliva Reagent，置于室温下孵化0或7天。RNA纯化后，使用Human Genome U133 Plus 2.0 GeneChip Array分析样本。0和7天的样本比较显示了未稳定的样本中有159个转录本的信号强度下降2倍，但采用RNAprotect稳定的样本中仅有38个转录本的信号强度下降2倍（以红点表示）。

高效稳定beta-actin转录本。

RNAprotect Saliva Reagent可在25°C下稳定唾液中的β-actin mRNA水平达3天。使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit，采用real-time RT-PCR定量mRNA水平。各时间点显示的是来自3个供体的4或6个唾液样本的平均CT值。

癌症生物标记物的mRNA水平稳定。

RNAprotect Saliva Reagent可稳定口腔癌的生物标记物的mRNA水平达168小时。各时间点显示的是来自9个供体的3个唾液样本的real-time RT-PCR分析的平均CT值。H3F3A：H3组蛋白，3A家族；OAZ1：鸟氨酸脱羧酶抗酶1；SAT：精脒/精胺N1-乙酰转移酶；S100P：S100钙结合蛋白P；DUSP1：双位点特异性磷酸酯酶1；IL8：白介素8；S100A8：S100钙结合蛋白A8（唾液中含量丰富的mRNA；非癌症生物标记物）。

性能

RNAprotect Saliva Reagent中稳定的的唾液可在37ºC运输或储存1天，在室温（15–25ºC）下14天，在2–8ºC长达4周，或在–20ºC或–80ºC长期储存。从唾液中纯化得到的RNA作为血液RNA的替代品，可通过生物芯片分析研究口腔和系统疾病，还可通过real-time RT-PCR进行癌症RNA生物标记的基因表达分析。

原理

RNeasy Protect Saliva Mini Kit提供RNA保护和分离的完整解决方案，在一个试剂盒中完成从样本收集到RNA纯化的整个过程。经验证的RNeasy硅胶膜技术与具有RNA稳定特性的RNAprotect Saliva Reagent相结合，可纯化得到高品质、完整的RNA。唾液中除了含有细胞和游离的核酸外，还含有细菌。当唾液从供体收集并与RNAprotect Saliva Reagent混合时，RNA立即被稳定并避免了细菌不受控制的生长，从而保证下游基因表达分析结果可靠。样本经稳定后，RNeasy技术整合了异硫氰酸胍的严谨性与硅胶膜纯化的速度及纯度，简化了总RNA分离过程。当收集的样本在RNAprotect Saliva Reagent中稳定前，细菌中的RNA就已经降解，纯化得到的RNA与从培养细胞和动物组织中纯化的RNA相比，质量会相对更低。

操作流程

从供体采集到唾液后（200 µl）立即与RNAprotect Saliva Reagent混合以稳定唾液中的RNA。使用RNeasy Micro Kit可从稳定的唾液中纯化总RNA。首先对唾液样本进行离心，再向得到的沉淀中加入Buffer RLT。加入乙醇后，将样本加到RNeasy MinElute离心柱中，离心后RNA结合到膜上。DNase消化可去除基因组DNA残留，在数次洗涤步骤中可洗去污染物。高纯度RNA可在仅为14 µl体积的RNase-free纯水中洗脱下来。RNAprotect Saliva Reagent也能稳定DNA。还可选用实验方案从稳定的唾液中纯化DNA或RNA及DNA。

应用

使用RNeasy Micro Kit从稳定的唾液中纯化总RNA是血液分析的一种无侵害的替代方式。此试剂盒可用于鉴定RNA生物标记的研究：

    · 口腔疾病

    · 系统疾病（如癌症）

参数