产品介绍
Bradford 蛋白定量法是最简单和快速的蛋白定量方法之一,可实现对浓度范围在 10-1000ug/ml 的蛋白质溶液经行定量。该定量的原理是考马斯蓝染料与蛋白质结合后,溶液的 颜色发生变化(棕色变成蓝色),结合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因而可通过 检测 595nm 的最大光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本试剂盒可对含有还原剂的样品经行测 定,但对于含有表面活性剂的样品的测定结果不稳定。
操作步骤
1.稀释 BSA 标准品:用与待测蛋白样品一致的稀释液按下表稀释 BSA 标准品。
2. 将按表 1 稀释好的 A-G BSA 标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各 5ul 分别加到作好标 记的 96 孔微孔板中。
3. 每孔中加入 200ul Bradford Dye Solution,充分混匀,盖上 96 孔板盖,室温放置 3-5 分钟。
注:Bradford Dye Solution 长时间放置可能会有沉淀产生,使用前晃动试剂瓶,使其重新混匀 即可。
4. 酶标仪波长设定在 595nm 处经行吸光值测定(测定时间尽量控制在反应后的 1 小时以内)。
5. 各浓度的BSA 标准品溶液的吸光值减去 Blank 值的平均值,绘制BSA 标准品溶液的标准曲线, 并根据 BSA 标准曲线计算出相应的检测样品的蛋白质浓度。
6. 如果所得到的蛋白质浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次进行测定。
保存条件
4℃保存,室温运输,1年有效。
注意事项
1. 本产品可以采用分光光度计或酶标仪测定蛋白浓度;
2. 建议每次测定蛋白样品时,绘制标准曲线,获得更准确数据;
3. BSA 标准品稀释液需和待测样品的稀释液一致;
4. 建议去除背景值后的吸光度值读数绘制标准曲线,由于操作误差导致标准品读数严重偏离 线性曲线的应舍去;
5. 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
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