HRM是一种封闭管式的、PCR后的分析方法，引起了极大地科学兴趣。HRM可根据分离（熔解）行为对双链PCR产物进行描述，随着温度升高，双链DNA（dsDNA）就会转变成单链DNA（ssDNA）。PCR产物可根据序列、长度、GC含量或链互补性，甚至是单个碱基变化进行区分。之前未知的和复杂的序列变化被认为是具有挑战性的基因分型应用，现在都可轻松分析。与常规方法不同，HRM可避免PCR产物的残留污染，是一种更简单、更经济的基于探针的基因分型分析。

独特的试剂盒组成确保高度特异性的扩增（见下表）。

新型的EvaGreen染料，用于不同的熔解曲线

Type-it HRM PCR Kit含有的EvaGreen是第三代饱和荧光染料，可选择性地结合到双链DNA上。与常规的SYBR^® Green I相比，EvaGreen可使用更高浓度，无PCR抑制，对GC含量丰富和AT含量丰富的区域具有相同的结合能力，无明显的序列偏向性。这使得EvaGreen非常适合对多种类型的PCR产物进行HRM分析，对更低的荧光差异产生不同的熔解曲线，确保获得标准化结果。
 

优化的HRM PCR Master Mix

HRM PCR Master Mix由HotStarTaq Plus DNA Polymerase和一种新型的HRM PCR缓冲液体系组成，能得到高度特异性的扩增和不同的熔解曲线，可用于难处理得基因组位点，如Class IV SNPs）。确保目的PCR产物的特异性扩增；减少非特异性产物和引物二聚体的形成，如果没有去除。

新型的缓冲液（包含在预混液中）通过在每个PCR循环的退火步骤中提高特异性引物的结合比率来维持每个PCR循环的特异性扩增。KCl 和 (NH₄)₂SO₄独特的平衡组合，使得该缓冲液在很宽的退火温度范围和Mg²⁺浓度范围内提供严格的引物退火条件。无需通过改变退火温度和Mg²⁺浓度来优化PCR反应。

适合难处理的突变位点

Type-it HRM PCR Kit是一种简单检测难处理突变位点的有力体系（参见" Highly specific and successful amplification of difficult genomic loci"）。位于GC含量高或高级二级结构区域的突变或SNPs都难以扩增，用于常规的HRM PCR方法。2x HRM PCR Master Mix包含新型的PCR添加剂Q-Solution，使用特定浓度的Q-Solution可帮助克服这些困难。Q-Solution通过修饰DNA的熔解行为，可成功扩增难处理的目标序列，无需优化。

Type-it HRM PCR Kit包括专门的、应用特异性的操作流程，预优化后用于多种real-time循环仪，如Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪、Rotor-Gene 6000和LightCycler 480。此外，采用试剂盒提供的优化操作流程还可使用Applied Biosystems 7500 Fast System和Applied Biosystems 7900。我们的网站上提供详细的操作流程。

快速循环步骤，易构建的HRM检测，可直接获得结果

Type-it HRM PCR Buffer的独有特色和试剂盒提供的优化操作流程，确保一次获得成功的HRM基因分型结果。无需冗长的反应参数优化，新的HRM基因分型检测可快速、简单地标准化，并用于常规研究。此外，Type-it HRM PCR Kit的快速循环操作流程通过缩短PCR的运行时间提高通量，可更快获得准确的结果。

方便的试剂盒规格

该试剂盒采用即用型、预优化预混液的规格，更加方便。使用预混液可节约时间，简化反应体系构建的手工操作，通过排除移液误差和污染的可能来源提高可重复性，尽量减少移液步骤，无需繁琐的计算。使用预混液可进行室温下的反应体系构建，快速、简单。预混液中含有的HotStarTaq Plus DNA Polymerase在95°C，5-minute被激活，可在热循环程序中简单设置。

应用

参数