产品简介

本试剂盒适用于从琼脂糖凝胶电泳中回收100bp-50kb大小DNA片段。其原理是利用溶胶液融化凝胶，然后使用特殊材质制成的吸附柱高效特异的吸附DNA片段，再用TE Buffer或灭菌去离子水洗脱DNA片段。一般可在30分钟内完成操作。本试剂盒的吸附柱的最大吸附量可达40 µg ，DNA回收效率高达85%以上；电泳凝胶不必使用低熔点的琼脂糖；回收的DNA片段纯度较高，可直接用后续的各种酶促反应、DNA连接、DNA测序等。

操作步骤

1. 将琼脂糖凝胶电泳后的单一目的片段切出，放入1.5 ml灭菌离心管中，加入约3倍凝胶量的溶胶液（体积比，0.1 g凝胶视为100 µl），65℃加热5-10分钟使胶块完全融化。

2. 所得液体（降至室温）加入吸附柱中，室温静置2分钟（特别重要），12,000转/分 离心30秒，弃去离心管中液体。

3. 向吸附柱中加入500-600 µl洗涤液，12,000转/分 离心 30秒，弃去离心管中液体。重复此步骤一次。

4. 再于12,000转/分 离心3-5分钟，或置于50℃烘箱彻底烘干。将吸附柱转移至1.5 ml离心管中。

5. 加入预热65℃-100℃ TE Buffer或灭菌去离子水（pH值7.5-8.0）30-50 µl静置2分钟，12,000转/分 离心2分钟，离心管内的液体即含有目的DNA片段。

注意事项

1. 切胶时尽量减小胶块的体积，胶块过大会影响DNA片段回收的效率；切碎胶块有利于凝胶的融化。 

2. 胶块完全溶解所需时间因凝胶的浓度、大小不同而不等，凝胶浓度大于2%，适当增加溶胶液的量。

3. 步骤4务必保证彻底清除吸附柱中的残液。

4. 步骤5根据回收产物的量，建议适当多加TE Buffer或灭菌去离子水；保证去离子水pH值7.5-8.0。

5. 为提高回收量，可将步骤5离心所得的溶液重新加入吸附柱中，静置2分钟，再次离心2分钟。

6. DNA产物应保存在-20℃，以防降解。

DNA浓度及纯度检测：

可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度和纯度。DNA在OD260处有显著吸收峰，OD260 值为1相当于50µg/ml双链DNA，40µg/ml单链DNA。OD260 /OD280 比值应为1.7-1.9，如用去离子水洗脱，比值会偏低，但不表示纯度低。