产品简介
ICL(EC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物种子在萌发过程中,通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL是乙醛酸循环的关键酶之一。
ICL催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD,NADH在340nm下有特征吸收峰,监测340nm吸光度的减小速率可间接反应ICL活性。
溶液的配制
1、 提取液:临用前将试剂七加入到提取液中,勿放于-20℃;
2、 试剂三:临用前每瓶加入 2.5mL 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂-20℃分装保存 2 周,避免反复冻融;
3、 试剂四:临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂-20℃分装保存 2 周,避免反复冻融;
4、 试剂五:使用前需先离心。根据用量按照试剂五:蒸馏水为 1:8 的体积比例充分混匀,现用现配;
5、 工作液配制:按试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五=29:35:42:42:3的比例将各试剂混合后备用(共151μL,1T的量),根据样本数量现用现配。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
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