测量细胞增殖和细胞周期是评估细胞健康，确定遗传毒性和评估药物药效的基本方法。常用的方法是直接测量DNA的合成。在以往的实验中，有几种方法，例如掺入放射性核苷（3H-thymidine）或BrdU。在这里，我们介绍一种新方法，点击化学-CuAAC（铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应），以及使用该反应直接测量在细胞周期S期的DNA合成。 “点击化学”是K. B. Sharpless于2001年引入的一个术语，它是生物连接中常用的一组具有生物相容性的小分子反应，允许将底物与特定生物分子（例如报道分子）结合在一起。

胸腺嘧啶核苷类似物，EdU（5-ethynyl-2’-deoxyuridine）可以在DNA合成过程中掺入DNA链中。 EdU的炔基是一种生物惰性基团，可以通过CuAAC反应与染料的叠氮基发生极强的选择性反应，从而生成1,2,3-三唑产物。 EdU和6-FAM Azide具有生物学上独特的基团，其连接后可以荧光标记增殖细胞的DNA，实验者可以获得低背景和高检测灵敏度。这种CuAAC反应可在极温和的条件下提供出色的区域选择性和定量转化。该反应是高效的，并且可以通过流式细胞术或荧光显微镜定量地使用。

EdU是BrdU的理想替代品，因为它不受苛刻的DNA变性条件（通常使用HCl，加热或用DNase消化）的影响。在基于BrdU的检测中，需要额外的DNA变性以使BrdU暴露于抗BrdU抗体，抗体与基于EdU的检测中使用的荧光染料相比是巨大的。与巨大的抗体不同，炔基和叠氮基的体积非常小，因此6-FAM Azide在基于醛的标准固定和去污剂透化作用下就可以进入DNA。此外，基于BrdU的方法耗时且难以连贯的进行，BrdU的抗体可表现出非特异性结合，此方法所需的苛刻处理可能会对样品的完整性，细胞形态和图像质量产生不利影响。由于在基于EdU的测定中反应条件温和，因此您可以准确确定细胞增殖，同时保留细胞形态，DNA完整性，抗原结合位点。 DNA完整性的保留是您可以进行DNA染色，包括使用用于细胞周期分析的染料染色。

6-FAM Azide（最大激发波长为496 nm，最大发射波长为516 nm）。

    · 操作简单，所需时间更少，无需变性步骤或苛刻的处理

    · 效率高，亮度高

    · 更好的保护细胞形态，抗原结构和DNA完整性

    · 由于不使用可变的BrdU抗体，因此具有很高的一致性