测量细胞增殖和细胞周期是评估细胞健康、确定遗传毒性和评估药物药效的基本方法，常用的方法是直接测量DNA 的合成。在以往的实验中常用方法包括掺入放射性核苷（3H-thymidine）或BrdU等。而EdU Flow Cytometry Assay Kits (HF594)则采用了一种新的方法：点击化学-CuAAC（铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应），使用该反应可直接测量在细胞周期S期的DNA合成。

在基于BrdU的检测中，需要额外的DNA变性（通常使用HCl、加热或用DNase消化）以使BrdU暴露于抗BrdU抗体。胸腺嘧啶核苷类似物EdU（5-ethynyl-2’-deoxyuridine）是BrdU的理想替代品，因为它不受苛刻的DNA变性条件的影响，EdU可以在DNA合成过程中掺入DNA链中。EdU的炔基是一种生物惰性基团，可以通过CuAAC反应与染料的叠氮基发生极强的选择性反应，从而生成1, 2, 3-三唑产物。EdU和HyperFluor™ 594 azide具有生物学上独特的基团，其连接后可以荧光标记增殖细胞的DNA，具有低背景和高检测灵敏度。这种CuAAC反应可在极温和的条件下提供出色的区域选择性和定量转化。该反应是高效的，并且可以通过流式细胞术或荧光显微镜定量地使用。

EdU Flow Cytometry Assay Kits (HF594)采用的是HyperFluor™ 594 azide与EdU进行连接后荧光标记增殖细胞的DNA，可通过流式细胞仪进行检测（HyperFluor™ 594 azide最大激发波长为590 nm，最大发射波长为617 nm）。