产品简介
4-香豆酸:辅酶 A 连接酶(4-coumarate:CoA ligase,4CL)是木质素生物合成的关键酶之一,主要催化肉桂酸 及其羟基或者甲氧基衍生物生成相应的辅酶 A 酯,这些中间产物随后进入苯丙类衍生物支路合成途径。该酶主要 存在于高等植物、酵母和菌类中,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水 果石细胞含量而提高其品质提供依据。
4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA,其在 333nm 下测有特征吸收峰,测定 4-香豆酸 CoA 的生成速 率,即可反映 4CL 活性。
溶液的配制
1、 提取液:内含不溶物,使用前摇匀;
2、 试剂二:临用前加入 6 mL 蒸馏水溶解,可以分装后-20℃保存,避免反复冻融;
3、 试剂四:临用前用 6 mL 蒸馏水溶解备用,可以分装后-20℃保存,避免反复冻融;
4、 试剂五:加入 1 mL 乙醇溶解,临用前用蒸馏水稀释 40 倍后备用,现用现配;
5、 工作液的配制:按体积比将试剂二:试剂三:试剂四:试剂五=1:1:1:1 的比例配制工作液,现用现配。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和 蒸馏水。
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