产品介绍

BCA（Bicin-choninic Acid）蛋白定量法是目前广泛应用的蛋白定量方法之一，可实现对蛋白 质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。该定量的原理是在碱性介质中，蛋白质可将 Cu2+还原成 Cu1+的反应，然后使用含有 BCA 的独特试剂，利用比色法检测 Cu1+，形成一种在 562nm 处有强 吸收值的紫色复合物。通过与标准品曲线对比，获得带测定蛋白的浓度，具有高灵敏度和高选 择性的特点。 

产品特色

1. 不受蛋白质种类的影响，在 0.02-2mg/ml 浓度范围内蛋白质浓度与吸光值成线性关系；

2. 对表面活性剂的干扰影响小；

3. 蛋白浓度测定简单、显色速度快和稳定性好。

操作步骤

1.稀释 BSA 标准品：用与待测蛋白样品一致的稀释液按下表稀释 BSA 标准品。

2. 配制 BCA 工作液：

a.计算 BCA 工作液总量： BCA 工作液总量=（BAS 标准品样本个数+未知样本个数）X 复孔数 X 每个样本 BCA 工作液体 积。

b. 根据计算出的 BCA 工作液需要总量，将 BCA-A Solution 和 BCA-B Solution 按照 50:1 的体 积比，配制 BCA 工作液，充分混匀。

3. 定量检测：

1）按上表，将稀释好的 A-G BSA 标准品和待测蛋白样品各 25ul 分别加入到作好标记的 96 孔微板孔中，推荐每个待测的样本做 2-3 个平行反应。(根据样品的浓度，可提前稀释 5 倍 或 10 倍)

2）每孔加入 200ul BCA 工作液，充分混匀，盖上 96 孔板盖，37 度孵育 30 分钟，冷却至室 温，在 3-5 分钟内完成检测。

3）使用分光光度计或酶标仪测定 562nm 处的每个样品及 BSA 标准品的吸光值，同时做好 记录。

4）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

保存条件

注意事项

1. 本产品可以采用分光光度计或酶标仪测定蛋白浓度。

2. 建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，获得更准确数据。

3. BSA 标准品稀释液需和待测样品的稀释液一致。

4. BCA 法测定蛋白浓度时，吸光值会随时间的延长不断加深，并且显色反应会因浓度升高而加 快，如果浓度较低，适合的较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

5. 建议去除背景值后的吸光度值读数绘制标准曲线，由于操作误差导致标准品读数严重偏离 线性曲线的应舍去。

6. 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。